基于HPLC指紋圖譜的黃芩道地藥材與非道地藥材的鑒別研究

　　[摘要] 目的：比較道地、非道地黃芩的化學成分差異，研究產地、生長方式（野生栽培）對藥材化學成分的影響，為黃芩道地藥材鑒別和質量評價提供科學依據(jù)。
　　方法：采用HPLC指紋圖譜方法對不同產地及生長方式的黃芩藥材中的化學成分進行檢測，采用系統(tǒng)聚類分析、主成分分析及成分組峰面積模式對指紋譜數(shù)據(jù)進行評價。
　　結果：道地藥材與非道地藥材指紋譜輪廓特征明顯不同。現(xiàn)代道地產區(qū)河北承德的黃芩指紋譜除內蒙古赤峰（現(xiàn)代非道地產區(qū)）的樣品指紋譜特征與其相似外明顯區(qū)別于其他產地；古代本草上所記載的黃芩產區(qū)甘肅慶陽，陜西延安，山東臨沂，山西長治、晉中的黃芩樣品化學特征相似；現(xiàn)代非道地產區(qū)甘肅定西、隴南，陜西商洛的黃芩藥材指紋譜特征相似；野生黃芩的阿替苷含量高于栽培黃芩。
　　結論：利用指紋圖譜輪廓特征可對道地與非道地黃芩藥材進行鑒別區(qū)分，該研究結果可為黃芩藥材質量控制，以及道地與非道地黃芩藥材的藥性藥效研究提供參考依據(jù)。
　　中藥黃芩為唇形科植物貝加爾黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效^[1]，目前在我國北方大部分地區(qū)都有分布^[2]�，F(xiàn)代藥理研究表明其主要活性成分為黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素等黃酮類化合物，具有解熱、抗炎、抗氧化等活性^[3]，而阿替苷等非黃酮類化合物具有神經保護、改善記憶、抗細胞損傷等作用^[4-5]。
　　道地藥材指經過中醫(yī)臨床長期應用優(yōu)選出來的，在特定地域，通過特定生產過程所產的，較在其他地區(qū)所產的同種藥材品質佳、療效好，具有較高知名度的藥材�，F(xiàn)今習慣以河北承德為黃芩的道地產地[2， 6]，內蒙古、山東、山西、甘肅、陜西等地也有較多黃芩生產。其中甘肅慶陽、陜西延安、山東一帶在唐代曾為道地產地，《圖經本草》、《證類本草》中記載山西也有黃芩生產^[7-9]。
　　為控制黃芩藥材的質量，學者們對不同產地^[10-12]、不同采收期^[13]、不同生長發(fā)育期^[14]、不同生長方式（栽培和野生）^[15]以及不同規(guī)格^[16]的黃芩藥材的指紋圖譜進行了研究，并對藥材中的黃酮類成分進行了定性定量分析^[17-20]。此外，肖蓉等^[21]還對河北道地藥材指紋圖譜進行研究，用相似度評價和系統(tǒng)聚類分析的方法提出了道地藥材指紋圖譜模式。但道地與非道地黃芩藥材的化學差異尚不明確，通過指紋圖譜進行黃芩產地鑒別尚無直接的參考依據(jù)。本課題組在對黃芩道地產地考證的基礎上，比較了來源于古代和現(xiàn)代的道地和非道地產地的黃芩的解熱和抗炎藥效，發(fā)現(xiàn)道地產區(qū)的黃芩樣品作用強于非道地產區(qū)的樣品，證明了黃芩存在道地性^[22]。為探討黃芩道地藥材的化學特征，本研究從我國北方主要產地收集了野生和栽培黃芩藥材共63份，進行了HPLC指紋譜表征和比較，運用主成分分析、聚類分析和成分組峰面積模式比較等方法分析數(shù)據(jù)，以期為黃芩道地藥材鑒別和質量評價提供參考依據(jù)。
　　1 材料
　　Agilent 1100 型高效液相色譜儀，配有二元泵、DAD檢測器、Agilent化學工作站；Phenomenex Gemini C₁₈色譜柱（4.6 mm× 250 mm， 5 μm）。
　　甲醇（色譜純，F(xiàn)isher公司），無水甲酸（分析純， 天津光復精細化工研究所），雙蒸水（娃哈哈飲用純凈水，杭州娃哈哈集團）。提取用甲醇（分析純，北京化工廠）。黃芩苷（批號110715-200815）、黃芩素（批號111595-200905）和漢黃芩素（批號111541-200403）對照品均購自中國食品藥品檢定研究院；漢黃芩苷、千層紙素A苷、千層紙素A、阿替苷、白楊素-6-C-α-L-阿拉伯吡喃糖-8-C-β-D-葡萄吡喃糖苷、5，7，2′，6′-4羥基黃酮、粘毛黃芩素Ⅲ，是由北京大學藥學院天然藥物化學研究室制備，經波譜方法鑒定結構，并用HPLC測定純度均達到98%以上^[23]。
　　本實驗檢測藥材共計63份（表1），全部藥材經北京大學藥學院生藥學研究室蔡少青教授鑒定為唇形科黃芩屬植物貝加爾黃芩S. baicalensis的干燥根，憑證標本存放于北京大學藥學院生藥標本室。
　　2 方法
　　2.1 供試品制備
　　采集的黃芩藥材去除雜質，制成飲片并粉碎。粉碎后的黃芩樣品在低溫下干燥2 h，迅速精密稱定0.5 g，加入70%甲醇50 mL，室溫超聲提取30 min，靜置至澄清，上清液用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。
　　2.2 色譜條件
　　Phenomenex Gemini C₁₈色譜柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）。流動相為1%甲酸溶液（A 相）和甲醇（B相）。梯度洗脫程序為0～10 min，20%～40%B；10～20 min，40%B；20～30 min，40%～46%B；30～45 min，46%B；45～50 min，46%～50%B；50～80 min，50%～80%B。流速1 mL·min^-1，檢測波長274 nm，進樣量10 μL；柱溫30 ℃，梯度洗脫。
　　2.3 色譜峰鑒定
　　利用對照品對黃芩藥材中黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素、千層紙素A苷、千層紙素A、阿替苷、白楊素-6-C-α-L-阿拉伯吡喃糖-8-C-β-D-葡萄吡喃糖苷、5，7，2′，6′-四羥基黃酮、粘毛黃芩素Ⅲ10個成分進行了指認，并根據(jù)各成分的MS裂解規(guī)律和紫外吸收特征， 對黃芩指紋圖譜中其余的17個主要色譜峰進行了MS鑒定^[24]。

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