苦碟子藥材及其注射液中化學(xué)成分的HPLC—ESI—MSn分析

　　[摘要] 應(yīng)用 HPLC-ESI-MSn建立1種苦碟子藥材及其注射液的快速定性分析方法。通過(guò)與對(duì)照品保留時(shí)間、多級(jí)質(zhì)譜信息對(duì)照，快速定性分析苦碟子藥材及其注射液中的化學(xué)成分。共鑒定出33個(gè)化合物，核苷類3個(gè)、有機(jī)酸類16個(gè)、黃酮類7個(gè)以及倍半萜內(nèi)酯類7個(gè)，其中通過(guò)對(duì)照品比對(duì)準(zhǔn)確鑒定了12個(gè)化合物，11個(gè)化合物為首次在苦碟子中發(fā)現(xiàn)。結(jié)合已知化合物的裂解規(guī)律和未知化合物的多級(jí)質(zhì)譜信息，對(duì)5個(gè)同分異構(gòu)體的化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行了預(yù)測(cè)。所建立的苦碟子 HPLC-ESI-MSn定性分析方法簡(jiǎn)單、快速、高效，可以為苦碟子的質(zhì)量控制和評(píng)價(jià)提供有效依據(jù)。
　　[關(guān)鍵詞] 苦碟子；HPLC-ESI-MSn；裂解規(guī)律；核苷；有機(jī)酸；黃酮；倍半萜內(nèi)酯
　　[收稿日期] 2013-03-29
　　[基金項(xiàng)目] 國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973）項(xiàng)目（2012CB518406）
　　[通信作者] *喬延江，教授，Tel：（010）84738660，E-mail：yjqiao@263.net
　　[作者簡(jiǎn)介] 劉穎，助理研究員，Tel：（010）64286052，E-mail：liuyingtcm@gmail.com 苦碟子又名滿天星，學(xué)名抱莖苦荬菜 Ixeris sonchifolia （Bge.）Hance，為菊科苦荬菜屬植物�？嗟�子注射液為抱莖苦荬菜提取物加工制備而成，具有活血止痛，清熱祛瘀的功效，臨床主要用于冠心病、心絞痛、急性腦梗死等�？嗟�子注射液雖為單味藥制劑，但其成分也較為復(fù)雜。已有研究顯示，苦碟子中主要有核苷、有機(jī)酸、黃酮、倍半萜內(nèi)酯和木脂素等類化合物^[1-4]。如何較全面地快速闡明苦碟子的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)？常規(guī)的提取分離技術(shù)成本大，周期長(zhǎng)，對(duì)環(huán)境污染較大，因此本研究采用 HPLC-ESI-MSn對(duì)苦碟子藥材及其注射液中化學(xué)成分進(jìn)行了快速定性分析，以期為苦碟子及其注射液的質(zhì)量控制與安全性評(píng)價(jià)提供依據(jù)。
　　1 材料
　　Agilent 1100 型液相色譜儀，配有二元梯度泵、在線真空脫氣裝置、自動(dòng)進(jìn)樣器、色譜柱恒溫箱、光電二極管陣列檢測(cè)器及 Chem Station 工作站；電噴霧離子源（ESI）-MSD Trap XCT plus 離子阱質(zhì)譜儀（美國(guó) Agilent 科技有限公司）；KQ-250DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；Millipore Synergy UV型超純水機(jī)（美國(guó) Millipore 公司）；R200D 型電子分析天平（德國(guó) Sartorius 公司）。
　　尿苷（批號(hào)120809）、鳥(niǎo)苷（批號(hào)120731）購(gòu)買于上海融禾醫(yī)藥科技有限公司；腺苷（批號(hào)110879-200202）、咖啡酸（批號(hào)110885-200102）、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷（批號(hào)11720-201106）、木犀草素（批號(hào)111520-200504），購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；3-咖啡酰奎寧酸、5-咖啡�？鼘幩帷�4-咖啡�？鼘幩�、3，4-二咖啡酰奎寧酸、3，5-二咖啡�？鼘幩崤c4，5-二咖啡�？鼘幩�，購(gòu)于成都普瑞法科技開(kāi)發(fā)有限公司；菊苣酸與芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，購(gòu)于成都德天生物科技有限公司；純度均大于98%。吉林通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的苦碟子注射液（批號(hào)120414）憑處方購(gòu)于北京中醫(yī)藥大學(xué)東方醫(yī)院。苦碟子藥材為吉林通化華夏藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)盧建秋研究員鑒定為菊科苦荬菜屬植物抱莖苦荬菜 I. sonchifolia 的干燥地上部分；甲醇、乙腈（色譜純，德國(guó) Merck 公司），乙酸（色譜純，美國(guó) Tedia 公司），所用水為超純水。
　　2 方法與結(jié)果
　　2.1 溶液制備
　　2.1.1 對(duì)照品溶液的準(zhǔn)備 分別取腺苷、3-咖啡�？鼘幩�、5-咖啡酰奎寧酸、4-咖啡酰奎寧酸、咖啡酸、菊苣酸、3，4-二咖啡�？鼘幩帷�3，5-二咖啡�？鼘幩帷�4，5-二咖啡酰奎寧酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品適量，加甲醇制成適宜濃度的儲(chǔ)備液，后適當(dāng)稀釋制成混合對(duì)照溶液，即得。
　　2.1.2 供試品溶液的制備 取苦碟子藥材粉末適量，加甲醇超聲提取30 min，靜置，上清液經(jīng)0.22 μm微孔濾膜過(guò)濾，即得。取吉林通化華夏（批號(hào)120414）生產(chǎn)苦碟子注射液2支，混合后經(jīng)0.22 μm 微孔濾膜過(guò)濾，即得。
　　2.2 分析條件
　　2.2.1 色譜條件 Thermo BDS hypersil C₁₈色譜柱（4.6 mm × 250 mm， 5 μm），流速1.0 mL·min^-1，檢測(cè)波長(zhǎng)254 nm，柱溫30 ℃，進(jìn)樣量5 μL，流動(dòng)相為乙腈（A）-0.5%乙酸溶液（B），洗脫梯度為：0 min，2%A，15 min，8%A，30 min，18%A，45 min，21%A，55 min，28%A。
　　2.2.2 質(zhì)譜條件 采用ESI源，負(fù)離子模式，霧化氣壓力0.24 MPa（N₂，>99.99%），干燥氣流速（N₂，>99.99%）11.0 L·min^-1，干燥氣溫度350 ℃，毛細(xì)管電壓3.5 kV，全掃描范圍為 m/z 100～800，3 級(jí)碎片掃描，多級(jí)質(zhì)譜的碰撞電壓為1 V。
　　2.3 苦碟子藥材及其注射液 HPLC-ESI-MSn分析結(jié)果
　　應(yīng)用 HPLC-DAD-ESI-MSn整體分析苦碟子藥材及其注射液各類成分：根據(jù)多級(jí)質(zhì)譜的碎片信息，采取對(duì)照品對(duì)照和參考已有文獻(xiàn)的方式，對(duì)苦碟子藥材及其注射液中4大類成分共33種化合物進(jìn)行了快速鑒定，并依據(jù)已知化合物的裂解規(guī)律推斷了5個(gè)互為同分異構(gòu)體的未知化合物。混合對(duì)照品、苦碟子藥材和苦碟子注射液的 HPLC-DAD 圖與總離子流圖（TIC）分別見(jiàn)圖1，2，各類成分的歸屬信息見(jiàn)表1，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖3。

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